胚胎干細胞是指來源于著床前囊胚期的內(nèi)細胞團或早期胚胎原始生殖嵴的原始生殖細胞的一種多潛能細胞。1981年，Evans等利用實驗中獲得的延遲著床的囊胚并從中分離培養(yǎng)獲得了增殖且未分化的小鼠囊胚內(nèi)細胞團，培養(yǎng)于 STO(一種已建系的小鼠胚胎成纖維細胞)飼養(yǎng)層 上，首次分離得到胚胎干細胞。1998年，Thomson等從體外受精發(fā)育至囊胚階段的人胚胎中分離獲得內(nèi)細胞團，將其接種于小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上，經(jīng)分離培養(yǎng)逐漸形成能長期穩(wěn)定傳代的人胚胎干細胞，首次成功建立了人胚胎干細胞系。

　　胚胎干細胞是在體外無限增殖、自我更新和多向分化潛能的細胞，這種特性使其在誘導(dǎo)分化、遺傳病防治、器官移植等方面具有前景廣闊的臨床應(yīng)用價值，同時在新基因的發(fā)現(xiàn)、新藥開發(fā)、功能基因的組織學(xué)研究、致畸實驗等方面也具有廣泛的應(yīng)用前景。選擇較優(yōu)化的細胞培養(yǎng)體系對于胚胎干細胞的研究及臨床應(yīng)用至關(guān)重要。飼養(yǎng)層對胚胎干細胞自我更新及全能性的維持起重要作用，目前其機制仍未完全闡明，很大程度上與飼養(yǎng)層所提供的細胞接觸及復(fù)雜的蛋白分子環(huán)境有關(guān)。

　　小鼠胚胎成纖維細胞因其取材方便、易于制備和作用效果好等優(yōu)點而成為胚胎干細胞培養(yǎng)首選的且較常用的飼養(yǎng)層細胞。

　　小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層制備：人胚胎干細胞傳代前1d制備飼養(yǎng)層細胞。0.1%明膠水溶液加入培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶底部包被培養(yǎng)瓶，置37培養(yǎng)箱孵育2h后備用。取細胞融合率約90%的第2-4代小鼠胚胎成纖維細胞，棄原培養(yǎng)液，將2mL含10mg/L絲裂霉素C及體積分數(shù)為10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶，置37培養(yǎng)2h。棄絲裂霉素C，用PBS洗5次，每次2min(動作要輕柔，以免細胞層脫落，必要時可在鏡下觀察細胞層有無脫落)。加入0.25%胰酶2mL消化，加入等體積的含體積分數(shù)為10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液中止消化，并用吸管輕輕吹打瓶底，使細胞脫壁。收集消化細胞，800r/min離心5min，棄上清，加含體積分數(shù)為10%胎牛血清的DMEM重懸，用血細胞計數(shù)板計數(shù)。取出經(jīng)明膠包被培養(yǎng)瓶，棄去明膠水溶液，以5.0×105個/瓶接種細胞，含體積分數(shù)為10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，備用。使用前需換用胚胎干細胞培養(yǎng)液